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数字PCR技术路线概述
数字PCR技术路线简要介绍
数字PCR技术作为新一代PCR技术,市场前景广阔,应用领域众多,临床需求明确,由此受到国际巨头和国内新锐公司的青睐。目前整个数字PCR市场已进入成长期,资本关注度越来越高。但同质化以及是否具有核心技术仍需值得重点关注。
第一代PCR
技术在扩增后,通过凝胶电泳进行分析,仅可获得定性结果。
直到20世纪90年代,伴随着生物荧光技术的发展,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)应运而生,并成为核酸定量检测的
第二代PCR
主流技术,沿用至今。由于qPCR为大体积反应系统,存在较多的背景干扰,无法获得绝对定量结果,随着检测要求的提高,qPCR逐渐无法满足临床一些超高灵敏度、精密度的检测要求。
至20世纪末,Vogelstein 等提出
第三代数字PCR
( digitalPCR,dPCR) 的概念,将一个样本分充分稀释,分配到不同的反应单元,每个单元包含少于或等于一个拷贝的目标分子( DNA 模板) ,在每个反应单元中进行单独、平行的PCR反应,扩增结束后
收集捕获各个反应单元的荧光信号
(
数字PCR的精髓所在!
)进行
泊松分布
(
数字PCR另一个精髓
)
统计学分析,以实现绝对定量及稀有等位基因的检测。
如何收集捕获反应单元的荧光信号?
由于众所周知的技术壁垒原因,目前市面上存在两种技术路线:以Bio-Rad和亿百体育app下载(有限)公司 生物为主的
流式计数逐滴收集捕获
反应单元荧光信号技术路线和以传统荧光定量PCR收集捕获荧光信号的
芯片式CCD拍照
技术路线。
流式计数逐滴收集捕获技术路线解决问题的着眼点是如何
精准、高效
地收集捕获反应单元荧光信号;芯片式CCD拍照技术路线解决问题的着眼点是如何制备反应单元的问题;
如何制备反应单元(微滴或微孔液滴)?
目前芯片式CCD拍照技术路线有两个方案,其中一个是将
芯片凿孔
,然后将反应体系物理涂抹,采取物理分割原理制备于微孔内,其制备质量和数量均受限,很难突破20,000个以上;另一个方案是基于微流控技术,将反应体系“
油包水
”液相分割制备反应单元,制备反应单元均匀度好,然后将制备好的反应单元
自由平铺
于芯片上,此法在制备数量上也是受限,基本在20,000-30,000个之间。
流式计数逐滴收集捕获技术路线也是采用
微流控技术,将反应体系“
油包水
”液相分割制备反应单元。亿百体育app下载(有限)公司 生物样本制备仪可制备多达
100,000个
微滴以上,而且有效微滴可达70,000个以上,非常符合“泊松分布”的胃口,故亿百体育app下载(有限)公司 生物是既解决了微滴制备问题,又解决了微滴荧光信号采集捕获的问题。
邮 编 :
510000
电 话 :
400-8298-906
地 址 :
广州国际生物岛螺旋三路6号第四层
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